透射电子显微镜（TEM）表征显示，空载外泌体（EVs）呈球形或杯状，而UiO-66-NH₂及UiO-66-NH₂@siRNA纳米颗粒均呈现均一的八面体。EVs@UiO-66-NH₂@siRNA复合材料显示出均匀的核壳结构，证实嗜酸乳杆菌源EVs成功包覆于UiO-66-NH₂@siRNA纳米颗粒表面（图1A）。TEM-EDS元素面扫分析检测到纳米颗粒中N、O、P、Zr元素的存在，证实siRNA的成功负载（图1B）。X射线衍射图谱表明UiO-66-NH₂与UiO-66-NH₂@siRNA纳米颗粒均具有高度结晶性，二者特征衍射峰高度一致，表明siRNA负载后未显著影响UiO-66-NH₂的晶体结构（图1C）。氮气吸附-脱附等温线显示，UiO-66-NH₂与UiO-66-NH₂@siRNA纳米颗粒均呈现微孔材料典型的I型等温线（图1D）。UiO-66-NH₂的比表面积为1036.15m²g^-1，孔容为0.65cm³g^-1；而UiO-66-NH₂@siRNA的比表面积降至916.36m²g^-1，孔容减至0.50cm³g^-1，此现象归因于siRNA分子占据纳米颗粒内部孔道（表S1）。动态光散射（DLS）测得EVs粒径为83.54nm，UiO-66-NH₂为117.94nm，负载siRNA后UiO-66-NH₂@siRNA粒径增大至131.98nm，经EVs包覆后，EVs@UiO-66-NH₂@siRNA粒径进一步增至175.51nm（图1E）。Zeta电位分析显示：负载带负电的siRNA后，UiO-66-NH₂电位由27.15mV降至20.55mV；经EVs包覆后，EVs@UiO-66-NH₂@siRNA电位转变为-22.35mV，与空载EVs的-20.29mV相近（图1F）。此外，通过Zeta电位时程监测发现：EVs@UiO-66-NH₂@siRNA在血清中8天内电位保持稳定，而UiO-66-NH₂@siRNA纳米颗粒的电位在1天内即从20.55mV降至-15.03mV（图S1）。上述结果表明EVs包覆层可有效屏蔽血清蛋白吸附，抑制蛋白冠的形成，从而赋予复合材料在生理环境中的良好稳定性。粒径与表面电荷的系列变化共同证实了siRNA在纳米颗粒中的成功负载及EVs在表面的有效包覆。

表S1. UiO-66-NH₂和UiO-66-NH₂@siRNA的多孔特征。

图S1. UiO-66-NH₂@siRNA和EVs@UiO-66-NH₂@siRNA在血清中的Zeta电位随时间变化（n=3）。

采用FAM标记siRNA（FAM-siRNA）检测UiO-66-NH₂对siRNA的包封效率。如图1G所示，当siRNA投料浓度从50nM增至200nM时，UiO-66-NH₂的siRNA负载效率呈下降趋势，而200nM组获得最高总载量（15.2μg/mg）。该高效负载特性与文献报道一致：寡核苷酸可通过多价相互作用吸附于UiO-66-NH₂表面。为验证纳米粒在酸性溶酶体环境中的降解行为，我们检测了EVs@UiO-66-NH₂@siRNA在不同pH磷酸盐缓冲液（PBS）中的siRNA释放特性。在pH7.4条件下，纳米粒仅呈现微量siRNA释放；pH5.0时释放率小幅提升；当pH降至3.0时，24h内siRNA释放率超过90%（图1H）。这表明纳米粒可在胞外环境中有效保护siRNA，进入细胞后通过溶酶体酸性环境触发载体降解，实现siRNA的高效释放。通过血清环境稳定性实验发现：UiO-66-NH₂@siRNA纳米粒在3天内粒径由134.92nm增至1μm，而EVs@UiO-66-NH₂@siRNA在8天内粒径基本维持不变（图1I），证实EVs包覆层可显著增强纳米粒在生理环境中的稳定性。

随后我们评估了纳米粒在核糖核酸酶（RNase）和血清环境中维持siRNA完整性的能力。结果显示：游离siRNA在RNase中仅能存留0.5h，在血清中可存续4h即完全降解；而EVs@UiO-66-NH₂@siRNA纳米粒内的siRNA基本未发生降解（图1J，K）。这表明金属有机框架（MOF）骨架与细胞外囊泡（EVs）共同形成的双重屏障可显著增强siRNA稳定性。进一步通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分析膜蛋白组成，发现EVs@UiO-66-NH₂@siRNA与原始EVs的蛋白条带高度吻合（图1L），证实嗜酸乳杆菌源EVs成功包覆于纳米颗粒表面。上述结果共同证实：成功构建了以UiO-66-NH₂为siRNA载体、表面包覆嗜酸乳杆菌EVs的复合纳米递送体系。

图2. EVs@UiO-66-NH₂@siRNA的细胞摄取机制。（A-D）RAW264.7单细胞与UiO-66-NH₂@siRNA、EVs@UiO-66-NH₂@siRNA分别共孵育3h、7h及12h后的激光共聚焦显微图像及绿色荧光定量分析（标尺=4.35m）。（E，F）流式细胞术定量检测RAW264.7细胞与纳米粒共孵育3h、7h、12h后的绿色荧光强度（n=3）。数据以均值±标准差表示，***P<0.001（统计学极显著差异）。

图S2. UiO-66-NH₂@siRNA和EVs@UiO-66-NH₂@siRNA与RAW264.7细胞（巨噬细胞）共孵育3小时、7小时及12小时后，应用激光共聚焦显微镜对细胞进行成像，并对绿色荧光强度进行定量分析（n=3，标尺=4.72μm）。蓝色通道显示DAPI染色的细胞核；红色通道显示Lyso-Tracker标记的溶酶体；绿色通道显示FAM荧光标记的siRNA。数据以均值±标准差表示。***表示P<0.001。

图S3. EVs@UiO-66-NH₂@siRNA在HT-29细胞中的摄取机制。（A-D）HT-29细胞与UiO-66-NH₂@siRNA、EVs@UiO-66-NH₂@siRNA分别共孵育3h、7h及12h后的激光共聚焦显微图像及绿色荧光定量分析（n=3，标尺=36.8μm）。（E，F）流式细胞术定量检测HT-29细胞与纳米粒共孵育3h、7h、12h后的绿色荧光强度（n=3）。数据以均值±标准差表示，***表示P<0.001（统计学极显著差异）。

在评估纳米粒抗炎效应前，我们通过体外实验系统评价了其生物安全性。将六类纳米材料（siRNA、UiO-66-NH₂、EVs、EVs@UiO-66-NH₂、UiO-66-NH₂@siRNA、EVs@UiO-66-NH₂@siRNA）分别与RAW264.7巨噬细胞及HT-29肠上皮细胞共孵育24h后，采用MTT法检测细胞活性。如图3A及图S4A所示，所有纳米材料在24h孵育周期内均未呈现细胞毒性，表明该递送系统具有良好的生物相容性。

图3.EVs@UiO-66-NH₂@siRNA的体外抗炎效应。（A）采用MTT法检测RAW264.7细胞经siRNA、UiO-66-NH₂、EVs、EVs@UiO-66-NH₂、UiO-66-NH₂@siRNA及EVs@UiO-66-NH₂@siRNA处理后的细胞活性（n=5）。（B-D）不同纳米颗粒处理组细胞中TNF-α、IL-6、IL-1β与IL-10的浓度通过ELISA测定（n=5）。数据以均值±标准差表示，*表示P<0.05，**表示P<0.01，***表示P<0.001。

图S4. EVs@UiO-66-NH₂@siRNA的体外抗炎效应。（A）MTT法检测HT-29细胞经siRNA、UiO-66-NH₂、EVs、EVs@UiO-66-NH₂、UiO-66-NH₂@siRNA及EVs@UiO-66-NH₂@siRNA处理后的细胞活性（n=5）。（B-D）ELISA定量分析HT-29细胞中炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β及抗炎因子IL-10的相对表达量（n=5）。数据以均值±标准差表示，*表示P<0.05，**表示P<0.01，***表示P<0.001。

巨噬细胞作为核心炎症免疫细胞，在炎症刺激下通过分泌多种炎症介质参与炎症级联反应。为验证siRNA对TNF-α生成的抑制效能，我们在脂多糖（LPS）刺激体系中引入纳米颗粒处理细胞培养上清液。相较于LPS单独刺激组，游离siRNA组与空载UiO-66-NH₂组的TNF-α诱导水平无显著差异，表明二者均缺乏抗炎活性。而经EVs、EVs@UiO-66-NH₂、UiO-66-NH₂@siRNA及EVs@UiO-66-NH₂@siRNA处理的细胞，其TNF-α浓度显著降低（图3B）。值得注意的是，不含siRNA的EVs组与EVs@UiO-66-NH₂组TNF-α降低幅度超45%，提示EVs具有天然抗炎特性。UiO-66-NH₂@siRNA组与EVs@UiO-66-NH₂@siRNA组分别使TNF-α降低57%与78%，表明EVs包覆层介导的天然抗炎活性与siRNA基因沉默效应协同作用，实现最显著的炎症抑制效果。其他炎症因子检测显示：EVs、EVs@UiO-66-NH₂及EVs@UiO-66-NH₂@siRNA均显著降低促炎因子IL-6、IL-1β水平（降幅>40%），同时提升抗炎因子IL-10浓度（增幅>2.1倍）（图3C-E）。综上证实：嗜酸乳杆菌源EVs通过双向调控炎症网络——上调抗炎因子（如IL-10）与下调促炎因子（如IL-6、IL-1β）发挥抗炎作用，而TNF-α siRNA的引入进一步强化该效应。HT-29细胞中细胞因子表达变化趋势与巨噬细胞一致（图S4 B-E），证明EVs@UiO-66-NH₂@siRNA对肠上皮细胞炎症因子具有显著调控效能。

此外，本研究同时制备并评估了临床相关溃疡性结肠炎（UC）药物（EVs@UiO-66-NH₂@抗TNF-α抗体）及商业递送系统（脂质体@TNF-α siRNA）。在降低RAW264.7细胞TNF-α水平方面，EVs@UiO-66-NH₂@siRNA表现出优于EVs@UiO-66-NH₂@抗TNF-α抗体的治疗效果（图S5）；同时，该复合载体在降低IL-6、IL-1β水平及提升IL-10表达方面，较脂质体@TNF-α siRNA展现出更强的调控作用。上述结果证实，EVs@UiO-66-NH₂@siRNA联合治疗体系相较于现有系统具有显著优势。

图S5. ELISA法检测经EVs@UiO-66-NH₂@siRNA、EVs@UiO-66-NH₂@抗TNF-α抗体及脂质体@TNF-α siRNA处理后TNF-α、IL-6、IL-1β与IL-10 mRNA相对表达水平（n=3）。

采用Cy5.5标记siRNA（Cy5.5-siRNA）灌胃给药24小时后，结肠组织荧光定量分析（图4A，C）显示：游离Cy5.5-siRNA组全胃肠道荧光信号持续微弱（峰值强度≤8.3kAU），证实其缺乏EV膜与UiO-66-NH₂保护时快速酶解；UiO-66-NH₂@Cy5.5-siRNA组荧光强度虽较游离组提升39.5±2.8%（*P<0.05），但结肠蓄积量仍显著受限（18.2±1.6kAU），此现象归因于MOF载体仅提供短暂保护且依赖被动EPR效应；而EVs@UiO-66-NH₂@Cy5.5-siRNA组呈现结肠特异性荧光蓄积（94.7±5.3kAU，***P<0.001），证实EVs修饰赋予的主动靶向能力可耐受胃酸环境（pH1.5-3.5）实现精准递送。灌胃24小时内主要器官（心/肝/脾/肺/肾）荧光强度均<5.0kAU（检测限）（图4B），表明纳米粒主要经肠道代谢。综上，体内分布实验证实EVs@UiO-66-NH₂@Cy5.5-siRNA具有显著结肠靶向蓄积特异性。

图4. EVs@UiO-66-NH₂@siRNA在胃肠道的分布特征。（A）口服给药24小时后，游离Cy5.5标记siRNA（free Cy5.5-siRNA）、UiO-66-NH@Cy5.5-siRNA及EVs@UiO-66-NH₂@Cy5.5-siRNA在小鼠胃肠道的分布情况。（B）三类纳米颗粒在其他主要器官（心、肝、脾、肺、肾）的分布特征。（C）口服三种纳米颗粒24小时后结肠组织Cy5.5荧光信号的定量分析（n=3）。数据以均值±标准差表示，*表示P<0.05，**表示P<0.01，***表示P<0.001。

DSS诱导性结肠炎作为模拟溃疡性结肠炎（UC）的经典动物模型，本研究通过7天DSS造模后给予EVs@UiO-66-NH₂@siRNA治疗4天评估疗效（图5A）。实验全程监测小鼠炎症相关参数，其中体重作为健康状态综合指标显示：与健康对照组相比，DSS造模组小鼠在造模期间体重持续显著下降（P<0.01），且游离siRNA组与UiO-66-NH₂组治疗后仍持续减重；而EVs组、EVs@UiO-66-NH₂组、UiO-66-NH₂@siRNA组及EVs@UiO-66-NH₂@siRNA组的减重速率均较游离组减缓。前两组效应归因于嗜酸乳杆菌EVs的天然抗炎活性，UiO-66-NH₂@siRNA组则源于TNF-α siRNA的基因沉默效应。值得注意的是，仅EVs@UiO-66-NH₂@siRNA组在治疗初期即呈现体重显著增加趋势（图5B），提示TNF-α siRNA沉默效应与EVs抗炎活性的协同作用介导了DSS模型小鼠的最佳体重恢复。

疾病活动指数（DAI）通过量化体重下降、粪便性状及便血程度评估溃疡性结肠炎（UC）严重程度。如图5C所示：健康对照组DAI值趋近于0且持续稳定；DSS造模组DAI值则快速攀升。至第12天治疗终点，EVs组、EVs@UiO-66-NH₂组及UiO-66-NH₂@siRNA组的DAI值较游离siRNA组和UiO-66-NH₂组显著降低，其中EVs@UiO-66-NH₂@siRNA组呈现最显著改善，证实该复合纳米粒可有效缓解结肠炎严重程度。

结肠长度作为DSS诱导溃疡性结肠炎（UC）炎症程度的直接评价指标：如图5D与5E所示，相较于健康对照组，经游离siRNA与UiO-66-NH₂处理的DSS模型小鼠结肠长度显著缩短51.4%，EVs及EVs@UiO-66-NH₂治疗组缩短39.1%，UiO-66-NH₂@siRNA治疗组缩短37.7%，而EVs@UiO-66-NH₂@siRNA治疗组仅缩短19.9%，表明该复合载体在所有治疗组中疗效最佳；同时DSS造模引发的脾肿大（该病理表型典型关联于炎症严重度及贫血状态）在EVs@UiO-66-NH₂@siRNA治疗组亦得到显著缓解（图5F与5G）。

图5.EVs@UiO-66-NH₂@siRNA在体内显著抗炎效应。（A）实验设计示意图显示研究方案；（B）各组小鼠13天内体重动态变化（n=5）；（C）疾病活动指数在13天观察期内的演变趋势（n=5）；（D）结肠组织形态学观察；（E）结肠长度量化统计分析（n=5）；（F）脾脏代表性宏观图像；（G）脾脏指数动态变化（n=5）；（H-K）qRT-PCR检测结肠组织炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β及抗炎因子IL-10 mRNA相对表达量（n=5）；（L-O）ELISA法测定结肠组织TNF-α、IL-6、IL-1β和IL-10蛋白表达水平（n=5）；（P）治疗终点结肠组织H&E染色病理学图像（标尺=20μm）。所有数据以均值±标准差表示，统计学显著性标注为：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。

免疫应答失调与溃疡性结肠炎（UC）进展密切相关。通过检测结肠组织髓过氧化物酶（MPO）活性（中性粒细胞浸润关键指标）发现：治疗1天后各组MPO水平无显著变化（图S6A）；经EVs、EVs@UiO-66-NH₂、UiO-66-NH₂@siRNA及EVs@UiO-66-NH₂@siRNA治疗5天后，MPO活性显著降低，其中EVs@UiO-66-NH₂@siRNA组抑制效果最显著（图S7），证实其有效缓解肠道炎症。qRT-PCR检测结肠组织细胞因子mRNA的结果显示，在治疗初期（1天），促炎因子TNF-α、IL-6、IL-1β维持高表达和抗炎因子IL-10低表达（图S6B-E），反映早期疗效尚未显现；在治疗终点，游离siRNA组与UiO-66-NH₂组TNF-α mRNA仍高表达，EVs@UiO-66-NH₂@siRNA组TNF-α下调最显著（图5H），表明TNF-α siRNA与嗜酸乳杆菌EVs协同抑制TNF-α转录。EVs相关组均显著下调IL-6/IL-1β，上调IL-10（图5I-K）。ELISA检测细胞因子蛋白水平与mRNA结果一致（图S5F-I和图5L-O）：EVs、EVs@UiO-66-NH₂及EVs@UiO-66-NH₂@siRNA对IL-6/IL-1β/IL-10的调控趋势相似，归因于EVs固有抗炎活性；而TNF-α蛋白在EVs@UiO-66-NH₂@siRNA组特异性下降，证实siRNA靶向沉默效应。H&E染色显示：EVs@UiO-66-NH₂@siRNA治疗组肠上皮结构规整完整，隐窝形态恢复正常（图5P）。综上，嗜酸乳杆菌EVs抗炎活性与TNF-α siRNA基因沉默效应协同发挥治疗作用，显著改善DSS诱导性UC。

图S6. EVs@UiO-66-NH₂@siRNA在小鼠模型中的单日体内治疗效果。（A）小鼠结肠组织髓过氧化物酶（MPO）相对活性检测（n=5）。（B-E）结肠组织中TNF-α、IL-6、IL-1β及IL-10 mRNA相对表达水平的实时荧光定量PCR（qRT-PCR）分析（n=5）。（D-G）结肠组织内TNF-α、IL-6、IL-1β与IL-10蛋白相对表达水平的酶联免疫吸附测定（ELISA）（n=5）。

图S7.处理后结肠组织相对髓过氧化物酶（MPO）活性（n=5）。数据以均值±标准差表示。*表示P<0.05，**表示P<0.01，***表示P<0.001。

日益增多的研究表明，肠道菌群在溃疡性结肠炎（UC）进程中起关键作用，尤其肠道菌群改变诱导的代谢物组成变化，对肠道免疫调节与上皮修复具有重要调控功能。基于EVs@UiO-66-NH₂@siRNA展现的显著疗效，我们进一步探究其对UC模型小鼠肠道菌群失调及代谢物的调控作用。首先对三组粪便样本进行16S rRNA基因测序：健康对照组、DSS诱导UC模型组、EVs@UiO-66-NH₂@siRNA治疗组。

微生物α多样性分析显示：DSS诱导的UC模型组Chao 1指数、Shannon指数、Simpson指数及菌群丰度均显著降低，符合DSS结肠炎模型中菌群多样性及丰富度普遍降低的特征；而EVs@UiO-66-NH₂@siRNA治疗组使上述指数恢复至健康组水平（图6A-C，图S8），证实其可改善UC小鼠菌群多样性及丰富度。基于β多样性的主坐标分析（PCoA）表明：治疗组菌群结构聚类于健康组区域，与模型组完全分离（图6D），提示该纳米粒可重塑健康菌群生态。非加权UniFrac距离矩阵的UPGMA聚类分析结合门/属水平物种丰度显示：在门水平，模型组厚壁菌门（Firmicutes）丰度降低，拟杆菌门（Bacteroidetes）升高，治疗组显著逆转此趋势，厚壁菌门/拟杆菌门比值（F/B值）提升至2.37±0.41（图6E，图S9）。此变化具有关键稳态调控意义。在属水平，治疗组致病性大肠埃希菌属（Escherichia）丰度降低，益生菌属（乳酸杆菌属Lactobacillus、双歧杆菌属Bifidobacterium、黏液乳杆菌属Limosilactobacillus）丰度显著升高（图S10）。LEfSe分析进一步揭示：治疗组显著降低致病菌（克雷伯菌属Klebsiella和肠杆菌科Enterobacteriaceae）丰度，同时提升益生菌（双歧杆菌属和粪杆菌属Faecalibaculum）丰度（图6F-K）。结论：EVs@UiO-66-NH₂@siRNA通过提升益生菌丰度、抑制病原菌增殖及优化F/B值，有效调控UC小鼠肠道菌群稳态。

图6. EVs@UiO-66-NH₂@siRNA对肠道菌群及代谢物的调控作用研究显示：通过Chao 1指数（A）、Shannon指数（B）及Simpson指数（C）评估微生物α多样性；主成分分析（D）表征菌群β多样性；门水平微生物丰度（E）及LEfSe分析（F-G，LDA>3.0）揭示DSS组与治疗组菌群差异，其中克雷伯菌属（Klebsiella，H）、肠杆菌科（Enterobacteriaceae，I）、双歧杆菌属（Bifidobacterium，J）与粪杆菌属（Faecalibaculum，K）丰度显著改变；代谢组学分析中，差异代谢物火山图（L，红点：上调；绿点：下调）及聚类热图（M）筛选关键代谢物，组胺（N）、亚精胺（O）、皮质醇（P）和皮质酮（Q）表达显著逆转；KEGG通路富集（R）进一步阐明代谢调控机制（数据以均值±标准差表示；*表示P<0.05，**表示P<0.01，***表示P<0.001）。

图S8.基于物种观测数的微生物群落α多样性分析（n=5）。数据以均值±标准差表示。*表示P<0.05。

图S9.门水平厚壁菌门（Firmicutes）与拟杆菌门（Bacteroidetes）的比值（n=3）。数据以均值±标准差表示，*表示P<0.001。

图S10.属水平肠道微生物组相对丰度柱状图。

非靶向代谢组学分析显示：相较于DSS结肠炎模型组，EVs@UiO-66-NH₂@siRNA治疗组粪便代谢组发生显著改变（图6L）；聚类热图证实治疗组特征性代谢物变化为：抗炎代谢物（组胺（Histamine）及亚精胺（Spermidine））显著上调——前者通过抑制巨噬细胞NF-κB活化及促炎因子生成缓解炎症，后者通过抑制肠上皮α-防御素表达维持菌群稳态；促炎代谢物（皮质醇（Cortisol）与皮质酮（Corticosterone））显著下调（图6M-Q）；KEGG通路富集分析进一步揭示该变化源于菌群组成的选择性调控（图6R）。综上，EVs@UiO-66-NH₂@siRNA通过重塑“菌群-代谢物轴”促进抗炎代谢物合成、抑制促炎激素释放，协同调节免疫应答及肠上皮修复，最终缓解肠道炎症。

为评估EVs@UiO-66-NH₂@FAM-siRNA的体内毒性，健康小鼠经口灌胃高剂量纳米粒后24h采集血液及主要器官，H&E染色显示：与健康组相比，高剂量组心、肝、脾、肺、肾组织结构完整，未见病理性形态改变（图7A）；TUNEL染色证实纳米粒组重要器官细胞凋亡水平与健康组无显著差异（图7B）；血清肝功能指标天冬氨酸氨基转移酶（AST）与丙氨酸氨基转移酶（ALT）水平无统计学差异（图S11A，B），表明该纳米颗粒未诱发肝损伤及功能异常。综上，EVs@UiO-66-NH₂@FAM-siRNA展现良好生物相容性，可作为安全的siRNA递送系统用于溃疡性结肠炎治疗。

图S11. PBS及EVs@UiO-66-NH₂@siRNA给药后血清中（A）AST与（B）ALT浓度（n=5；ns表示无显著差异）。